1、转染效率低

1.1 未有效形成转染混合物：转染试剂加入DNA后立即充分混匀。

1.2 转染试剂/DNA比例未优化：DNA用量固定，加入不同量转染试剂，优化二者比例。

1.3 DNA用量未优化：优化转染的DNA用量，确保转染试剂/DNA比例稳定。

1.4 多聚物/细胞表面接触质量差：离心培养板（如果不影响细胞）。注意－离心会损伤某些原代细胞。

1.5 DNA质量差：选择高质量DNA，A260/A280比值不能低于1.8。

1.6 细胞汇合率未优化：优化细胞铺板条件，确保转染前粘附细胞的汇合率为50－70%；确保转染前悬浮细胞处于对数生长期。

1.7 支原体污染：细胞培养物中的支原体污染会降低转染效率和重复性。经常检测细胞是否被支原体污染。

2、 高细胞毒性

2.1 待转基因有毒性： 验证表达的转基因是否有毒性。

2.2 培养条件未优化： 缩短复合物与细胞的培养时间，转染3－6小时后用新鲜的生长培养基替换转染混合物。

2.3 DNA用量未优化： 降低转染的DNA用量。

2.4 细胞密度太低： 增加细胞的铺板密度。