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转染疑难解答指南

转染疑难解答指南

1、转染效率低

1.1 未有效形成转染混合物:转染试剂加入DNA后立即充分混匀。

1.2 转染试剂/DNA比例未优化:DNA用量固定,加入不同量转染试剂,优化二者比例。

1.3 DNA用量未优化:优化转染的DNA用量,确保转染试剂/DNA比例稳定。

1.4 多聚物/细胞表面接触质量差:离心培养板(如果不影响细胞)。注意-离心会损伤某些原代细胞。

1.5 DNA质量差:选择高质量DNA,A260/A280比值不能低于1.8。

1.6 细胞汇合率未优化:优化细胞铺板条件,确保转染前粘附细胞的汇合率为50-70%;确保转染前悬浮细胞处于对数生长期。

1.7 支原体污染:细胞培养物中的支原体污染会降低转染效率和重复性。经常检测细胞是否被支原体污染。

 

2、 高细胞毒性

2.1 待转基因有毒性: 验证表达的转基因是否有毒性。

2.2 培养条件未优化: 缩短复合物与细胞的培养时间,转染3-6小时后用新鲜的生长培养基替换转染混合物。

2.3 DNA用量未优化: 降低转染的DNA用量。

2.4 细胞密度太低: 增加细胞的铺板密度。