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细胞培养用血清的储存及使用前处理

细胞培养用血清的储存及使用前处理

 

如何存储血清?

我们建议血清按照包装上的要求,保存在-5℃至-2O℃。但是,若存放于4℃时,请勿超过一个月。若您一次无法用完一瓶,建议您无菌分装血清至恰当的灭菌容器内,再放回冷冻。反复冻融会对血清的品质造成不良影响。

我们建议您将血清从冷冻箱取出后,先置于2~8℃冰箱使之溶解,然后在室温下使之全溶。但必须注意的是,溶解过程中必须规则地摇晃均匀。

血清解冻后发现有絮状沉淀物出现, 该如何处理?

血清在解冻过程(包括没有完全解冻)或储存在2-8℃时,血清中的各种蛋白和脂蛋白(如凝集素、纤维蛋白原和玻连蛋白等)可能会聚集成团,形成絮状沉淀或外观混浊;在运输过程中,由于时间较长,所以往往有少许解冻,因此也可能稍有沉淀,但这些都不影响血清性能。若您欲去除这些絮状沉淀物,可以将血清分装至无菌离心管内,以400g稍微离心,上清液即可接着加入培养基内一起过滤。

一般是以56℃,30分钟来处理已解冻的血清,因为此加热步骤,可以使补体去活化,而补体所参与的反应有:溶细胞,平滑肌的收缩,肥大细胞和血小板组胺的释放,增强吞噬作用,淋巴细胞、巨噬细胞的趋化和激活。在免疫学研究,培养ES细胞,昆虫细胞和平滑肌细胞时,推荐使用热灭活血清。

实验显示,经过正确处理的热灭活血清,对大多数的细胞而言是不需要的。经此处理过的血清对细胞的生长只有微小的促进,或完全没有任何作用,甚至通常因为高温处理影响了血清的质量,而造成细胞生长速率的降低。而经过热灭活的血清,沉淀物的形成会显著增多,这些沉淀物在倒置显微镜下观察,像是“小黑点”,常常会让研究者误以为是血清遭受污染,而把血清放在37℃环境中,又会使此沉淀物更增多,使研究者误认为是微生物的分裂扩增。因此我们建议您,若非必须,您可以不做热灭活处理血清。这样,不仅节省您宝贵的时间,更确保血清的质量。只在做免疫学研究或培养干细胞、昆虫细胞和平滑肌细胞时,才推荐做热灭活。我公司也有已经热灭活的血清可供选择。

我们建议您在使用血清的时候,注意下列的操作:

  • 解冻血清时,请按照所建议的逐步解冻法(-20℃至4℃至室温),若血清解冻时改变的温度太大(如-20℃至37℃),实 验显示非常容易产生沉淀物。
  • 解冻血清时,请随时将之摇晃均匀,使温度及成分均一,减少沉淀的发生。
  • 请勿将血清置于37℃太久。若在37℃放置太久,血清会变得混浊,同时血清中许多较不稳定的成分也会因此受到损害,而影响血清的质量。
  • 血清的热灭活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,则毋须做此步骤。
  • 若必须做血清的热灭活,请遵守56℃,30分钟的原则,并且随时摇晃均匀。温度过高,时间过久或摇晃不均匀,都会造成沉淀物的增多。

 为什么储存在冰箱中的牛血清会出现沉淀?

牛血清没有预老化,储存在2-8℃时,血清中的各种蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纤维蛋白原、玻粘连蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可见的混浊。这应该不会影响血清的质量。推荐在-20℃储存胎牛血清,避免反复冻融。