Home
公司动态及促销

联系方式

销售热线 021-64288051/2 021-64869486 021-64869486(传真) 13611693188

 

在线留言 咨询 订货
QQ1 QQ2 QQ3 MSN
EMail: sale@3bio.cn More

创新的技术,专业的服务

重复劳动大大减少, 工作效率显著提高, 经营状况一目了然,客户体验本质差异化。这就是上海欧为信息科技专为中小贸易及公司及生产企业提供的在线进销存管理系统带来的变化。


系统简介 在线购买 更多联系方式  


组织DNA提取试剂盒 Tissue DNA Kit

组织DNA提取试剂盒 Tissue DNA Kit

组织DNA提取试剂盒 Tissue DNA Kit
产品编号:D3396
分类:分子生物学
品牌:OMEGA
规格:200T
单价: ¥0.00

在线咨询 在线订货 返回上页

第1 页共6 页

D3396 Tissue DNA Kit
√实验前请按说明书正确稀释以下溶液。
 使用【无水乙醇】对DNA Wash Buffer 进行稀释,稀释后室温保存。
货号加入量
D3396-00 6mL
D3396-01 60mL
D3396-02 80mL(每瓶)
 使用【异丙醇】对HBC Buffer 进行稀释,稀释后室温保存。
货号加入量
D3396-00 1.2mL
D3396-01 10mL
D3396-02 32mL
 使用前请检查溶液是否由于低温或静置析出沉淀,如有,请置于37℃孵育至完全
溶解再使用。
提取步骤:
A. 组织基因组DNA 提取
以下方案可从最多30mg 组织中提取基因组DNA,产量取决于样品来源。
可选步骤: 虽然使用机械匀浆器匀浆组织并非必要,但是用液氮研磨组织可以提高
裂解效果和减少孵育时间。当液氮挥发完后,将粉末转移至1.5 mL 的离心管中,加入
200μl Buffer TL,开始第二步操作;
1. 称取≤30 mg 的组织,加入到1.5mL 的离心管中,加入200μl TL Buffer。将样品剪
成一块块小块可以加速裂解效果。如果样品大于30mg,可按比例提高Buffer TL 的用
量,如样品为60mg,则加入400μl Buffer TL。
2. 加入25μl OB Protease Solution,涡旋混匀,放置在55℃水浴摇床中振荡孵育至组
织完全消化。如果没有水浴摇床,水浴期间每隔20-30min 拿出涡旋混匀一次。消化时
间取决于样品使用量和组织类型,一般3 小时就能获得良好的裂解效果。
3. (选做)某些组织例如肝脏包含有高丰度的RNA,它可能会和DNA 一起回收出来,
虽然RNA 的污染并不会影响PCR 操作,但可以在这个步骤将其去除。可加入5μl(对
于30mg 的样品) RNaseA(25mg/mL)混匀,于室温下放置2-5min,继续下面的操
作;
4. 室温下,10,000×g 离心5min 去除不溶解的杂质,小心将上清液转移到新的1.5mL
中文简易说明
中国总代理:广州飞扬生物工程有限公司│ 技术支持:020-32051125 │ QQ:800848200 │ omegabiotek.com.cn
第2 页共6 页
离心管中而留下不溶解的杂质。
5. 加入220 μl BL Buffer,涡旋混匀。70℃水浴10min。加入Buffer BL 后,可能会
产生一些沉淀,但不会影响DNA 的回收。根据样品的使用量调节Buffer BL 的体积;
6. 加入220μl 无水乙醇(室温,96-100%),最高速度涡旋以充分混匀。如果样品的
用量超过30mg,调节无水乙醇的用量;如果这时候看到沉淀,用枪头吹打10 次以吹
散沉淀。
7. 将HiBind® DNA 结合柱套在2mL 收集管中(已提供),将第6 步得到的所有溶解
液转入HiBind® DNA 结合柱中(包括所有的沉淀物),8,000×g 离心1min 以结合
DNA,弃滤液和收集管。
8. (选做)如果样品多于30mg,就按照上面的步骤把剩下的裂解液转入HiBind® DNA
结合柱,确保所有的溶液都通过HiBind® DNA 结合柱;
9. 将HiBind® DNA 结合柱套在新的2mL 收集管中,加入500 μl HBC Buffer 至
HiBind® DNA 结合柱中,8,000×g 离心1min,弃滤液和收集管;
Note:HBC Buffer 使用前必须按照说明书用异丙醇进行稀释。
10. 将HiBind® DNA 结合柱套在新的2mL 收集管中,加入700 μl DNA Wash Buffer
至HiBind® DNA 结合柱中,8,000×g 离心1min,弃滤液;
Note:DNA Wash Buffer 使用前必须按照说明书用无水乙醇进行稀释。
11. 重复步骤10,用DNA Wash Buffer 进行二次洗涤;
12. 将HiBind® DNA 结合柱套在同一个2mL 收集管中,>12,000×g 离心空甩2min
以干燥HiBind® DNA 结合柱的基质。
13. 将HiBind® DNA 结合柱套在新的1.5mL 灭菌离心管,加入50-200μl 预热至70℃
Elution Buffer 至HiBind® DNA 结合柱的膜中央。室温静置3min;
14. 室温下,10000×g 离心1min,以洗脱DNA。
15. 重复步骤13-14。
注意:每次洗脱可得到60%-70%结合于柱上的DNA,因此两次洗脱的总量一般
可大于90%。然而,增加洗脱体积会减少最终产物的浓度。若想得到高浓度的DNA,
可使用50μl~100μl 的Elution Buffer 来洗脱(产量将略微下降)。洗脱体积低于
50μl 将大大减少产量。在某些情况下,加入Elution buffer 后可以在70℃温育
HiBind® DNA 结合柱以提高产量。另外可以使用第一次洗脱液进行第二次洗脱。
16. 将洗脱的DNA 保存至-20℃。
中国总代理:广州飞扬生物工程有限公司│ 技术支持:020-32051125 │ QQ:800848200 │ omegabiotek.com.cn
第3 页共6 页
B. 从培养细胞中提取基因组DNA
该方案适合于从5×106 个细胞中纯化25μg 的基因组DNA.
1. 准备细胞重悬液
a. 冰冻的细胞样品必须在开始之前进行解冻。离心收集细胞,用PBS 缓冲液洗涤一次,
加入200μl 4℃预冷的PBS 缓冲液重悬细胞,按照步骤2 进行操作;
b. 如果细胞悬浮生长,1,200xg 离心收集5×106 个细胞,去除培养基,用PBS 缓冲液
洗涤一次,加入200μl 4℃预冷的PBS 缓冲液重悬细胞,按照步骤2 进行操作;
c. 如果细胞贴壁生长,用胰蛋白酶消化后,收集细胞,用PBS 缓冲液洗涤两次,加入
200μl 4℃预冷的PBS 缓冲液重悬细胞,按照步骤2 进行操作;
2. 加入25μl OB Protease Solution,涡旋混匀;
3. (选做)某些培养细胞包含有高丰度的RNA,它可能会和DNA 一起回收出来,一
般情况下,RNA 的污染并不会影响PCR 操作,但可以在这步将其去除。因此,可加入
4μl RNase A(100mg/mL)混匀,于室温下放置2-5min,继续下面的操作。
4. 加入220μl Buffer BL,涡旋混匀(室温,96-100%);放置70℃水浴10min。加
入BL Buffer 后,可能会产生一些纤维状沉淀,但不会影响DNA 的回收。根据样品的
使用量调节BL Buffer 的体积;
5. 加入220μl 无水乙醇,高速涡旋混匀。根据样品的用量,调节无水乙醇的用量;如
果这时候看到沉淀,可用枪头吹打10 次打散沉淀。
6. 下面的操作请参照组织DNA 提取方案的7-16 步。
C. 从老鼠尾巴中提取基因组DNA
把已冻藏的样品和OB 蛋白酶溶液放到室温下,70℃预热Elution Buffer(每个样品要
0.5mL)。
1. 剪碎长度为0.2-0.5cm 的老鼠尾巴放置于1.5mL 的离心管中。如果有必要的话,可
灼烧伤口以防止流血。可适当地在动物耳朵上做标记,放到干净笼子里。
注:老鼠年龄不能超过6 个星期,因为超过6 个星期后,老鼠尾巴将很难裂解而很
难得到理想的回收产物。如可能的话,可在小鼠2-4 个星期时,切出小鼠尾巴,然
后保存于-70℃。
2. 加入200μl TL Buffer 和25μl OB Protease Solution,涡旋混匀;
3. 55℃摇床水浴1-4h,如果没有摇床水浴锅,可在水浴期间每隔20-30min 取出涡旋;
加入25μl OB 蛋白酶,涡旋混匀,放置55℃水浴摇床孵育1-4 小时或至充分裂解。
中国总代理:广州飞扬生物工程有限公司│ 技术支持:020-32051125 │ QQ:800848200 │ omegabiotek.com.cn
第4 页共6 页
如果没有水浴摇床,水域期间,每隔20-30min 拿出涡旋混匀一次。不充分的裂解会
导致柱子阻塞而降低DNA 产量。样品的消化时间取决于小鼠尾巴的使用量和老鼠的
年龄。2 周大的小鼠的0.5cm 尾巴一般只需要2 小时就能获得良好的效果。对于年龄
老的小鼠可消化过夜。注:骨和毛是不能消化的。
(选做)小鼠尾巴中的RNA 可能会和DNA 一起纯化出来。一般情况下,RNA 的
污染不会影响到PCR 反应,但可能会影响其它酶促反应。如需去除RNA,可加入
15μl RNaseA(25mg/mL)混匀,于室温孵育2min。
4. 室温下,10,000×g 离心5min 沉淀去除不溶解的杂质和毛发。小心转移上清液至新
的1.5mL 离心管中,在吸取上清液时,不要吸到任何沉淀物。
5. 加入等体积的BL Buffer 和等体积的无水乙醇,最高速度涡旋混匀。涡旋混匀是必需
的。如果这时候看到沉淀,可通过颠倒混匀沉淀。
6. 下面的操作请参照组织DNA 提取方案的步骤7-16。
D. 从石蜡包埋的组织中提取基因组DNA
1. 剪称不超过30mg 的组织(~2mm3)于2mL 离心管中;
2. 加入1mL 二甲苯,充分涡旋混匀以去除石蜡;
3. 室温下,10,000×g 离心10min;吸取上清液,不要碰到组织沉淀;
4. 加入1mL 无水乙醇洗涤去除二甲苯,室温下,最大速度离心5min;弃上清液,不
要倒出组织沉淀;
5. 重复步骤4,用无水乙醇再次洗涤;
6. 37℃,空气干燥15min;
7. 加入200μl TL Buffer 和25μl OB Protease Solution,涡旋混匀,放置在55℃水浴
摇床中振荡孵育至组织完全消化。
Note:如果没有水浴摇床,水浴期间每隔20-30min 拿出涡旋混匀一次。消化时间
取决于样品使用量和组织类型,一般3 小时就能获得良好的裂解效果。
8. 在90℃孵育30-60min;
9. 然后按“组织DNA 提取方案”的第3 步起开始往下操作;
注:组织中含有多聚甲醛,会导致RNA 或DNA 降解,降解的程度取决于固定剂
的类型,但是得到的DNA 通常都小于500bp。降解的原因跟E.Z.N.A.组织DNA
提取方案无关,而PCR 检测500bp 以下片断可以得到的良好结果。
中国总代理:广州飞扬生物工程有限公司│ 技术支持:020-32051125 │ QQ:800848200 │ omegabiotek.com.cn
第5 页共6 页
E. 全血与体液DNA 提取方案
1. 将样品转移到1.5mL 离心管中,加入10mM Tris-HCl、PBS 或Elution Buffer 将样
品体积调整至250μl;
2. 加入25μl OB Protease Solution 和250μl BL Buffer,涡旋混匀;
Note:加入BL Buffer 后,可能会产生一些纤维状沉淀,但不会影响DNA 的回收。
(选做)如果需要,RNA 可在此步除去:
(1) 加入4μl RNase A(100mg/mL);
(2) 室温下静置2min;
(3) 接着步骤3;
3. 70℃孵育10min,期间取出涡旋混匀一次;
4. 加入250μl 无水乙醇,涡旋混匀;
5. 将HiBind® DNA 结合柱套在2mL 收集管中,将第4 步得到的所有溶解液转入
HiBind® DNA 结合柱中,最大速度(≥10,000xg)离心1min 以结合DNA,弃滤液;
6. 将HiBind® DNA 结合柱套在2mL 收集管中,加入500μl HBC Buffer,最大速度离
心30s,弃滤液;
Note:HBC Buffer 使用前必须按照说明书用异丙醇进行稀释。
7. 将HiBind® DNA 结合柱套在新的2mL 收集管中,加入700 μl DNA Wash Buffer
至HiBind® DNA 结合柱中,最大速度离心30s,弃滤液;
Note:DNA Wash Buffer 使用前必须按照说明书用无水乙醇进行稀释。
8. 重复步骤7,用DNA Wash Buffer 进行二次洗涤;
9. 将HiBind® DNA 结合柱套在同一个2mL 收集管中,最大速度离心空甩2min 以干
燥HiBind® DNA 结合柱的基质。
10. 将HiBind® DNA 结合柱套在新的1.5mL 灭菌离心管,加入50-200μl 预热至70℃
Elution Buffer 至HiBind® DNA 结合柱的膜中央。室温静置2min;
11. 室温下,最大速度离心1min,以洗脱DNA。
12. 重复步骤10-11;
注意:每200μl Elution Buffer 洗脱可得到60%~70%结合于柱上的DNA,因此
两次洗脱的总量一般可大于90%。然而,增加洗脱体积会减少最终产物的浓度。若
想得到高浓度的DNA,可使用50μl-100μl 的Elution Buffer 来洗脱(产量将略微
下降)。洗脱体积低于50μl 将大大减少产量。在某些情况下,加入Elution buffer
后可以在70℃温育HiBind® DNA 结合柱以提高产量。另外可以使用第一次洗脱液
进行第二次洗脱。
13. 将洗脱的DNA 保存至-20℃。
中国总代理:广州飞扬生物工程有限公司│ 技术支持:020-32051125 │ QQ:800848200 │ omegabiotek.com.cn
第6 页共6 页
F. 组织基因组DNA 提取-真空/离心方案
根据组织基因组DNA 提取方案,完成对样品的裂解,匀浆,蛋白酶消化,和上HiBind®
DNA 结合柱。按照下面的步骤来代替了连续的离心操作。
1. 按照使用说明准备好真空抽滤盒,然后把V-Spin DNA 结合柱连接到真空抽滤盒上。
2. 把样品转入V-Spin HiBind® DNA 结合柱。
3. 打开抽滤装置,让样品通过HiBind® DNA 结合柱,然后关掉抽滤装置。
4. 加入500μl HBC Buffer 洗涤HiBind® DNA 结合柱,打开真空抽滤装置,让溶液通
过HiBind® DNA 结合柱。
5. 加入700μl DNA Wash Buffer 通过抽滤洗涤HiBind® DNA 结合柱。
6. 重复步骤5。
7. 把HiBind® DNA 结合柱套上2mL 的收集管,最高速度离心,(不高20,000xg)2min,
甩干HiBind® DNA 结合柱的基质。
8. 把HiBind® DNA 结合柱套上干净的1.5mL 离心管,加入100-200μl Elution Buffer,
静置1-2min,离心1min,洗脱DNA。
中文翻译仅供辅助阅读,详情请以英文说明书为准
中国总代理:广州飞扬生物工程有限公司│ 技术支持:020-32051125 │ QQ:800848200 │ omegabiotek.com.cn

选择3bio,选择成功