DiR Iodide (DiIC18(7)) 细胞膜深红色荧光探针
DiR Iodide (DiIC18(7)) 细胞膜深红色荧光探针
DiR Iodide (DiIC18(7)) 细胞膜深红色荧光探针
产品描述
DiI, DiO, DiD和 DiR作为一类长链的亲脂性二烷基碳菁类染料（Dialkylcarbocyanines）荧光染料家族，用
于标记细胞膜以及其他脂溶性生物结构。作为一类环境敏感型荧光染料，当它们与膜结合或者与亲脂性生
物分子（例如蛋白质，虽然在水中其荧光强度很弱）结合时，其荧光强度显著增强。一旦进入细胞后，它
们在细胞内质膜中逐步扩散，于最佳浓度条件下可将整个细胞均匀染色。这些染料具很高的淬灭系数，偏
光依赖性和很短的激发寿命。四种染料呈现不同的荧光颜色，DiI（橙色荧光）、DiO（绿色荧光）、DiD（红
色荧光）、DiR（深红色荧光），为活细胞多色彩荧光成像分析和流式细胞术提供了一种便捷的工具。DiO和
DiI分别用标准FITC和TRITC滤光器检测，可结合使用。DiD可被633 nm 氦-氖（He-Ne）激光激发，具有比
DiI更长的激发和发射光波长，特别适合用于标记具本底荧光的细胞和组织。而，DiR在体内活体成像或者
示踪中意义非凡，因其所发射的近红外光可以高效地穿过细胞和组织，并且在近红外光范围内，其本底荧
光水平很低。
本品以DiR的碘盐形式提供，英文名：1,1-dioctadecyl-3,3,3,3-tetramethylindotricarbocyaine iodide，纯度≥95%，
适用于荧光检测研究。
产品特性
同义名：DiR Iodide; DiIC18(7); 1,1-dioctadecyl-3,3,3,3-tetramethylindotricarbocyaine iodide;
CAS NO.：100068-60-8 推荐滤光器：Omega- XF112, Chroma-41009
分子式：C63H101IN2 分子量：1013.39 g/mol
外观：蓝色至深蓝色固体 纯度：≥95% (HPLC)
Ex/Em：748/780 nm（甲醇） 溶解性：溶于DMF，DMSO，甲醇
化学结构式：
保存与运输方法
保存：-20ºC 干燥避光保存，至少一年有效。
运输：冰袋运输。
使用方法
【注意】以下使用方法仅用作参考，可根据具体的实验条件做出调整。
1. 染色液制备
1）储存液制备：用 DMSO或乙醇配置浓度1～5 mM的储存液。例如，取25mg DiR（Mw：1013.39 g/mol）
溶于4.93ml 无水DMSO中，充分溶解，即得到5mM的储存液。【注意】未使用的储存液分装储存在-20℃，
避免反复冻融，且要避光保存。
2）工作液制备：用合适的缓冲液（如：无血清培养基，HBSS或PBS）稀释储存液，调整到1～5 μM的工作
浓度。【注意】工作液最终浓度需要根据不同细胞系和实验体系来优化。建议从推荐浓度开始，以10倍范
围为区间进行最优浓度的摸索。
2. 悬浮细胞染色
1）加入适当体积的染色工作液重悬细胞，使其密度为1×106/mL。
2）37℃孵育细胞2～20min，不同的细胞最佳培养时间不同。可以20min作为起始孵育时间，之后优化以保
证得到均一化的标记结果。
3）孵育结束，按1000～1500 rpm离心5min。
4）去除上清液，之后轻柔加入37℃预热的生长培养液重悬细胞。
5）再重复3），4）步骤两次。
3. 贴壁细胞染色
1）将贴壁细胞培养于无菌盖玻片上。
2）从培养基中移走盖玻片，滤掉过量培养液，将盖玻片放在潮湿的小室内。
3）在盖玻片的一角加入100μL的染色工作液，轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞。
4）37℃孵育细胞2～20min，不同的细胞最佳培养时间不同。可以20min作为起始孵育时间，之后优化以保
证得到均一化的标记结果。
5）吸掉染色工作液，用培养液洗盖玻片2～3次，每次用预温的培养基覆盖所有细胞，孵育5～10min，然后
吸走培养基。
4. 显微镜检测
1）DiD，DiO，DiI和DiR滤光器的选择参见下表：
货号 荧光探针
最大激发/最大发射波长
（Ex/Em）
滤光片编号*
Omega 公司 Chroma 公司
MX4002-10MG DiI 549/565 nm XF108, XF32 41002, 31002
MX4001-10MG DiO 484/501 nm XF100,XF23
41001, 31001
41001, 31001
MX4004-25MG DiD 644/663 nm XF110, XF47 41008, 31023
MX4005-5MG DiR* 748/780 nm XF112 41009
*：滤光片编号是荧光显微镜检测的建议宽带滤片设置。
**：DiR 的荧光发射肉眼不可见，必须通过CCD 摄像头或其他近红外敏感检测器检测。
2）多色染料的同时检测，滤光器按照以下设定：
a) DiI和DiO＝Omega XF52，Chroma 51004；
b) DiI和DiD＝Omega XF92，Chroma 51007；
c) DiI，DiO和DiD＝Omega XF93，Chroma 61005；
5. 流式细胞仪检测
经DiO，DiI，DiD和DiR染色的细胞分别用流式细胞仪的FL1，FL2，FL3或FL4通道检测。
注意事项
1）经碳菁类染料（比如DiR）染色后的细胞能用多聚甲醛（PFA）固定，但不能用甲醇或其他溶剂的固定
剂。染色能承受0.1% Triton X-100或0.1% 毛地黄皂苷的透化处理，但会明显增强胞内染色。
2）经碳菁类染料（比如DiR）染色后的细胞不建议使用封片剂，因封片剂内的甘油或有机溶剂会溶解染料，
引起增加的胞内染色和随时间增加的高背景。建议直接在PBS或其他生理缓冲液内成像。使用PBS直接盖上
盖玻片，然后四周用指甲油密封。
3）荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。
4）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
常见问题
1. 我的实验需要观察几个小时内的活细胞形态变形（deformation），哪种膜探针能满足此要求？
亲脂的碳菁类染料比如DiI，DiO, DiD或DiR通常都能满足此要求。染料的烷基链越长，在脂质环境内的停
留性越好。
2. 我的实验先用亲脂碳菁类染料比如DiI染色，当后续进行抗体标记后信号丢失，为什么？
由于此类染料插入脂膜内，任何破坏膜结构都会引起染料丧失。这些步骤包括用表面活性剂（比如Triton
X-100）进行透化，或有机溶解比如甲醇。对于胞内抗体的标记进行透化是必不可少的，必然会引起染料丢
失。反而选择反应性染料比如CFDA SE，能与胞内组分进行共价结合，进而经固定和透化处理后能呈现更
好的停留性。
3. 我的实验用DiI标记神经元，之后进行固定和透化，结果没信号，什么原因？
DiI是亲脂染料，基本停留在细胞脂质内。当细胞表面活性剂进行透化或用醇类进行固定，都会将脂质和染
料洗脱掉。如果必须要进行透化，可选择CM-DiI，因其是共价结合到膜内蛋白上。可能经固定和透化后部
分信号会丧失，但有足够的信号保留下来使得能检测到。
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