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DiR Iodide (DiIC18(7)) 细胞膜深红色荧光探针

DiR Iodide (DiIC18(7)) 细胞膜深红色荧光探针

DiR Iodide (DiIC18(7)) 细胞膜深红色荧光探针
产品编号:MX4005
分类:分子生物学
品牌:国产
规格:5mg
单价: ¥328.00

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DiR Iodide (DiIC18(7)) 细胞膜深红色荧光探针

产品描述
DiI, DiO, DiD和 DiR作为一类长链的亲脂性二烷基碳菁类染料(Dialkylcarbocyanines)荧光染料家族,用
于标记细胞膜以及其他脂溶性生物结构。作为一类环境敏感型荧光染料,当它们与膜结合或者与亲脂性生
物分子(例如蛋白质,虽然在水中其荧光强度很弱)结合时,其荧光强度显著增强。一旦进入细胞后,它
们在细胞内质膜中逐步扩散,于最佳浓度条件下可将整个细胞均匀染色。这些染料具很高的淬灭系数,偏
光依赖性和很短的激发寿命。四种染料呈现不同的荧光颜色,DiI(橙色荧光)、DiO(绿色荧光)、DiD(红
色荧光)、DiR(深红色荧光),为活细胞多色彩荧光成像分析和流式细胞术提供了一种便捷的工具。DiO和
DiI分别用标准FITC和TRITC滤光器检测,可结合使用。DiD可被633 nm 氦-氖(He-Ne)激光激发,具有比
DiI更长的激发和发射光波长,特别适合用于标记具本底荧光的细胞和组织。而,DiR在体内活体成像或者
示踪中意义非凡,因其所发射的近红外光可以高效地穿过细胞和组织,并且在近红外光范围内,其本底荧
光水平很低。


本品以DiR的碘盐形式提供,英文名:1,1-dioctadecyl-3,3,3,3-tetramethylindotricarbocyaine iodide,纯度≥95%,
适用于荧光检测研究。


产品特性


同义名:DiR Iodide; DiIC18(7); 1,1-dioctadecyl-3,3,3,3-tetramethylindotricarbocyaine iodide;
CAS NO.:100068-60-8 推荐滤光器:Omega- XF112, Chroma-41009
分子式:C63H101IN2 分子量:1013.39 g/mol
外观:蓝色至深蓝色固体 纯度:≥95% (HPLC)
Ex/Em:748/780 nm(甲醇) 溶解性:溶于DMF,DMSO,甲醇
化学结构式:
保存与运输方法
保存:-20ºC 干燥避光保存,至少一年有效。
运输:冰袋运输。

使用方法
【注意】以下使用方法仅用作参考,可根据具体的实验条件做出调整。
1. 染色液制备
1)储存液制备:用 DMSO或乙醇配置浓度1~5 mM的储存液。例如,取25mg DiR(Mw:1013.39 g/mol)
溶于4.93ml 无水DMSO中,充分溶解,即得到5mM的储存液。【注意】未使用的储存液分装储存在-20℃,
避免反复冻融,且要避光保存。
2)工作液制备:用合适的缓冲液(如:无血清培养基,HBSS或PBS)稀释储存液,调整到1~5 μM的工作
浓度。【注意】工作液最终浓度需要根据不同细胞系和实验体系来优化。建议从推荐浓度开始,以10倍范
围为区间进行最优浓度的摸索。
2. 悬浮细胞染色
1)加入适当体积的染色工作液重悬细胞,使其密度为1×106/mL。
2)37℃孵育细胞2~20min,不同的细胞最佳培养时间不同。可以20min作为起始孵育时间,之后优化以保
证得到均一化的标记结果。
3)孵育结束,按1000~1500 rpm离心5min。
4)去除上清液,之后轻柔加入37℃预热的生长培养液重悬细胞。
5)再重复3),4)步骤两次。
3. 贴壁细胞染色
1)将贴壁细胞培养于无菌盖玻片上。
2)从培养基中移走盖玻片,滤掉过量培养液,将盖玻片放在潮湿的小室内。
3)在盖玻片的一角加入100μL的染色工作液,轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞。
4)37℃孵育细胞2~20min,不同的细胞最佳培养时间不同。可以20min作为起始孵育时间,之后优化以保
证得到均一化的标记结果。
5)吸掉染色工作液,用培养液洗盖玻片2~3次,每次用预温的培养基覆盖所有细胞,孵育5~10min,然后
吸走培养基。
4. 显微镜检测
1)DiD,DiO,DiI和DiR滤光器的选择参见下表:
货号 荧光探针
最大激发/最大发射波长
(Ex/Em)
滤光片编号*
Omega 公司 Chroma 公司
MX4002-10MG DiI 549/565 nm XF108, XF32 41002, 31002
MX4001-10MG DiO 484/501 nm XF100,XF23
41001, 31001
41001, 31001
MX4004-25MG DiD 644/663 nm XF110, XF47 41008, 31023
MX4005-5MG DiR* 748/780 nm XF112 41009
*:滤光片编号是荧光显微镜检测的建议宽带滤片设置。
**:DiR 的荧光发射肉眼不可见,必须通过CCD 摄像头或其他近红外敏感检测器检测。
2)多色染料的同时检测,滤光器按照以下设定:
a) DiI和DiO=Omega XF52,Chroma 51004;
b) DiI和DiD=Omega XF92,Chroma 51007;
c) DiI,DiO和DiD=Omega XF93,Chroma 61005;

5. 流式细胞仪检测
经DiO,DiI,DiD和DiR染色的细胞分别用流式细胞仪的FL1,FL2,FL3或FL4通道检测。
注意事项
1)经碳菁类染料(比如DiR)染色后的细胞能用多聚甲醛(PFA)固定,但不能用甲醇或其他溶剂的固定
剂。染色能承受0.1% Triton X-100或0.1% 毛地黄皂苷的透化处理,但会明显增强胞内染色。
2)经碳菁类染料(比如DiR)染色后的细胞不建议使用封片剂,因封片剂内的甘油或有机溶剂会溶解染料,
引起增加的胞内染色和随时间增加的高背景。建议直接在PBS或其他生理缓冲液内成像。使用PBS直接盖上
盖玻片,然后四周用指甲油密封。
3)荧光染料均存在淬灭问题,请尽量注意避光,以减缓荧光淬灭。
4)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
常见问题
1. 我的实验需要观察几个小时内的活细胞形态变形(deformation),哪种膜探针能满足此要求?
亲脂的碳菁类染料比如DiI,DiO, DiD或DiR通常都能满足此要求。染料的烷基链越长,在脂质环境内的停
留性越好。
2. 我的实验先用亲脂碳菁类染料比如DiI染色,当后续进行抗体标记后信号丢失,为什么?
由于此类染料插入脂膜内,任何破坏膜结构都会引起染料丧失。这些步骤包括用表面活性剂(比如Triton
X-100)进行透化,或有机溶解比如甲醇。对于胞内抗体的标记进行透化是必不可少的,必然会引起染料丢
失。反而选择反应性染料比如CFDA SE,能与胞内组分进行共价结合,进而经固定和透化处理后能呈现更
好的停留性。
3. 我的实验用DiI标记神经元,之后进行固定和透化,结果没信号,什么原因?
DiI是亲脂染料,基本停留在细胞脂质内。当细胞表面活性剂进行透化或用醇类进行固定,都会将脂质和染
料洗脱掉。如果必须要进行透化,可选择CM-DiI,因其是共价结合到膜内蛋白上。可能经固定和透化后部
分信号会丧失,但有足够的信号保留下来使得能检测到。
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货号 名称 规格
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