Home
公司动态及促销

联系方式

销售热线 021-64288051/2 021-64869486 021-64869486(传真) 13611693188

 

在线留言 咨询 订货
QQ1 QQ2 QQ3 MSN
EMail: sale@3bio.cn More

创新的技术,专业的服务

重复劳动大大减少, 工作效率显著提高, 经营状况一目了然,客户体验本质差异化。这就是上海欧为信息科技专为中小贸易及公司及生产企业提供的在线进销存管理系统带来的变化。


系统简介 在线购买 更多联系方式  


美国cytoskeleton罗丹明标记的鬼笔环肽(Phalloidin鬼笔鹅膏素)现货促销

美国cytoskeleton罗丹明标记的鬼笔环肽(Phalloidin鬼笔鹅膏素)现货促销

鬼笔环肽(Phalloidin)是从毒鹅膏菌 (Amanita phalloides)中提取出来的有毒成分,是含有7个氨基酸的肽段。鬼笔环肽因能与真核生物的纤维状肌动蛋 (F-actin)非常特异和高亲合力的结合,常用来标记F-actin而显示微丝骨架在细胞中的分布和动态变化。用荧光标记,如FITC或Rhodamine标记的鬼笔环肽可在荧光显微镜或激光共聚焦显微镜下清楚地观察到细胞的微丝结构,是细胞生物学研究的常用手段。

Product Uses Include

  • Stain F-actin in fixed cells
  • Stabilize actin filaments in vitro
  • Visualize actin filaments in vitro

Material
Phalloidin's usefulness as a laboratory tool is well established and lies in it's ability to inhibit microfilament de-polymerization. Thus, phalloidin stabilized microfilaments are used as substrates for the identification and characterization of the ever increasing number of microfilament associated proteins. In addition, rhodamine phalloidin can be used for staining the actin cytoskeleton in cells, and also as a fluorescent marker/stabilizer for microfilaments used in motility assays.

The rhodamine phalloidin is provided as a lyophilized powder. When reconstituted with 500 µl methanol, it is at 14 µM (200 x stock).

Purity
In keeping with our policy of providing only the highest quality products, we are now pleased to inform you that Cytoskeleton is offering rhodamine phalloidin at a chromatographic purity of >99%. This is the purest phalloidin commercially available for research use.

Biological Activity
We have determined that the microfilament stabilizing property of our product is equal or superior to any other commercially available phalloidins. Microfilaments in 70 nM phalloidin are stable at room temperature for over one week.

 
  
 
 

 

 Figure 1. A Swiss 3T3 fibroblast stained with rhodamine phalloidin (PHDR1). The phalloidin binds specifically to F-actin and does therefore stain the actin stress fibers in the cell
背景描述

鬼笔环肽是一种从鬼笔鹅膏中得到的有毒的环状七肽,可以与纤维肌动蛋白丝非常特异的结合,并且具有很高的亲和力。它能使肌动蛋白聚合物的临界浓度降低到小于1µg/mL,因此,常作为一种聚合促进剂使用。该物质可以被罗丹明染料标记,从而作为肌动蛋白抗体替代物广泛用于组织细胞培养、组织切片或无细胞系中的肌动蛋白标记。被罗丹明标记的肌动蛋白丝其生物学特性未发生改变(包括与肌球蛋白结合的能力)。

罗丹明标记的鬼笔环肽呈粉色,固体,分子量1306。其1 x 工作液即可对300-350张盖玻片的细胞进行染色。

注意:鬼笔环肽具有毒性,需小心操作(对人,其半数致死剂量为2mg/Kg)。

运输与保存方法

室温运输。使用前简短离心使样品至管底,加入500µl无水甲醇配制成14um的溶液。推荐将其溶液分装成10×50µl份于-20℃避光保存,按照这种方法可稳定保存6个月,冻干产物可以在4℃干燥环境(湿度<10%)下保存1年。

产品应用

应用1:免疫荧光

目前有多种方法可用于组织培养细胞中的微丝染色,而染色过程中固定是获得良好效果的关键步骤,根据不同的要求有不同的固定方法。用多聚甲醛或者戊二醛的方法固定可以取得较好的染色效果。

试剂

1)     罗丹明标记的鬼笔环肽;

2)     半丰度的3T3培养细胞;

3)     F-肌动蛋白染色试剂盒(或按4-7配制溶液);

4)     磷酸盐缓冲液(20mM,PH7.4,150mM NaCl);

5)     固定液(3.7% 多聚甲醛溶于PBSpH调制7.0);

6)     透化液;

7)     抗荧光淬灭封片液(Fluka Biohemika, Cat.#10981;

8)     100nM DAPI(溶于PBS;

9)     载玻片;

10)  盖玻片封口液。

经罗丹明鬼笔环肽标记的Swiss 3T3细胞中应力纤维图

备注:按照方法中的步骤利用Rhodamine phalloidin对生长于玻璃盖玻片上的半丰度的3T3细胞进行染色,利用带有480Ex/535Em设备的荧光显微镜进行观察(CCD摄像机,40倍目镜),明显可见被罗丹明鬼笔环肽染成红色的纤维蛋白丝和被DAPI染成蓝色的细胞核。

设备

1)荧光显微镜。

2)数字CCD照相机。

方法

1)     于盖玻片上培养组织细胞至半丰度;

2)   100nM Rhodamine phalloidin工作液的准备,即吸取3.5µl 14µM Rhodamine phalloidin的标记储存液于500µl PBS,室温避光保存。

3)     移除培养基,37℃下利用PBS轻轻洗涤培养细胞一次;

4)     利用固定液室温固定细胞10min

5)     PBS室温洗涤细胞30s

6)     室温透化细胞5min

7)     PBS室温洗涤细胞30s

8)   将盖玻片移至一张封口膜上,于潮湿的环境下加入200µl 100nM Rhodamine phalloidin,室温避光孵育30min

9)     PBS洗涤盖玻片3次;

10)  200µl 100nM DAPI复染DNA30s

11)  PBS冲洗盖玻片,翻转将其放置于滴有荧光猝灭液的载玻片上,用纸巾吸除多余液体;

12)  ℃避光保存上述载玻片;

13)  典型的F-肌动蛋白染色结果如图1

应用2:稳定荧光微丝的制备

在肌球蛋白马达蛋白的研究中,稳定的微丝对于肌动蛋白的能动性分析是一个很好的底物。Rhodamine phalloidin的结合不会影响肌球蛋白ATP酶对肌动蛋白的激活作用。

试剂

1)     肌动蛋白(250µg);

2)     常用肌动蛋白缓冲液(5mM Tris-HCl pH8.0, 0.2mM CaCl2)

3)     10 x聚合缓冲液(100mM Tris pH7.5, 500mM KCl, 20mM MgCl2,10mM ATP;Cat.#BSA02)

4)     罗丹明标记的鬼笔环肽。

设备

荧光显微镜;数字化CCD照相机。

方法

1)   配制具有0.2mM ATP 1.0mM DTT的肌动蛋白缓冲液,取250µl重悬兔肌肉肌动蛋白。混匀,冰浴1h

2)         加入1/10体积的聚合缓冲液室温聚合肌动蛋白1h

3)   2.5µl 14uM Rhodamine phalloidin500µl聚合缓冲液中,混匀,利用该溶液100倍稀释聚合的微丝;

4)   1滴抗荧光猝封液于载玻片上,吸取1µl标记的肌动蛋白于上述抗荧光猝灭封片液中;

5)     盖上盖玻片,吸除多余液体;

6)     显微镜观察,微丝呈2-10µm的长度,4℃避光可以稳定保存一周。

产用使用

1)用于固定的组织切片、组织培养细胞中微丝的荧光染色。注意:不像一些肌动蛋白抗体,Rhodamine phalloidin仅与F肌动蛋白丝结合,从而降低了荧光背景。另外,该染料的结合没有物种差异。

2)体外稳定的荧光微丝的制备。

报价及其他颜色的荧光标记的鬼笔环肽产品如下

货号

名称

规格

促销价

PHDR1

Rhodamine Phalloidin 罗丹明标记

500ul

2299

PHDG1-A

Acti-stain™ 488 phalloidin 绿色荧光标记

500ul

2599

PHDH1-A

Acti-stain™ 555 phalloidin 红色荧光标记

500ul

2599

PHDN1-A

Acti-stain™ 670 phalloidin蓝色荧光标记

500ul

2599